1、一般目的基因用于克隆表达的情况下，酶切位点的选择要考虑到：目的基因片段内部不含有所选的酶切位点，不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断； 2、实验后继应用的所有载体真核、原核、酵母、昆虫......